微生物無菌工作室規章制度

㈠ 為什麼在微生物學工作中必須注意無菌操作並嚴格遵守實驗室規則

無菌操作主要是保證目的菌種的優勢生長，以便後續的鑒定或純化

㈡ 無菌室的規程規范

目的
本規程旨在為無菌操作及無菌室的保護提供一個標准化規程。
適用范圍
生測實驗室
責任者
QC主管生測員
定義
無
注意事項
嚴格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進入無菌室應先關掉紫外燈。
規程
6.1.無菌室應設有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應達到10000級，室內溫度保持在18-24℃，濕度保持在45-65%。超凈台潔凈度應達到100級。
6.2.無菌室應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。
6.3.嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染者應停止使用。
6.4.無菌室應備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，75%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，等等。
6.5.無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。
6.6.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包紮嚴密，並應經過適宜的方法滅菌。
6.7.工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然後在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。
6.8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鍾以上，並且同時打開超凈台進行吹風。操作完畢，應及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌30分鍾。
6.9.供試品在檢查前，應保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用75%的酒精棉球消毒外表面。
6.10.每次操作過程中，均應做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。
6 .11.吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。
6.12.接種針每次使用前後，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻後，方可接種培養物。
6.13.帶有菌液的吸管，試管，培養皿等器皿應浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內消毒，24小時後取出沖洗。
6.14.凡帶有活菌的物品，必須經消毒後，才能在水龍頭下沖洗，嚴禁污染下水道。
參照
參照《葯品衛生檢驗方法》 《中國葯品檢驗標准操作規范》中 (無菌檢查法)章節 中華人民共和國醫葯行業標准 YY/T0188.6-1995《葯品檢驗操作規程》
分發部門
質量管理部

㈢ 無菌室的要求

1．工作室應矮小、平整，面積只需4米2左右，高2.2—2.3米，內部裝修應平整、光滑，無凹凸不平或稜角等，四壁及屋頂應用不透水之材質，便於擦洗及殺菌
2．室內採光面積大，從室外應能看到室內情況。
3．為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設緩沖走廊，走廊旁再設緩沖間，其面積可小於無菌室。
4．無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作台以1米為宜 ，其電源開關均應設在室外。
5．無菌室與緩沖間進出口應設拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應錯開，以免空氣對流造成污染。
6．無菌室的使用與管理
（1） 無菌室應保持清潔整齊，室內僅存放必須的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環、玻璃鉛筆等。&不要放與檢測無關的物品
（2） 室內檢驗用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。
（3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、門、窗、桌、椅及地面，然後用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，最後紫外燈殺菌半小時
（4） 定期檢查室內空氣無菌狀況，細菌數應控制在10個以下，發現不符合要求時，應立即徹底消毒滅菌。/無菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養基平板各3個（平板直徑均9厘米），置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時，然後倒置進行培養，測細菌總數應置37℃溫箱培養48小時；測黴菌數則應置27℃溫箱培養5天。細菌`黴菌總數均不得超過10個為 。
（5） 無菌室殺菌前，應將所有物品置於操作之部位（待檢物例外），然後打開紫外燈殺菌30分鍾，時間一到，關閉紫外燈待用
（6） 進入無菌室前，必須於緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。
（7） 操作應嚴格按照無菌操作規定進行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環境的無菌狀態。
器材及場所的滅菌消毒
微生物檢驗用器材及場所必須進行滅菌或消毒處理，不同的對象採用不同的處理方法
1． 高壓蒸汽滅菌: 工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內，一般採用121℃滅菌半小時,當然不同的培養基有不同的要求,應分別處理
2． 火焰滅菌：接種針、接種環等可直接火焰滅菌
3． 高溫乾燥滅菌： 各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置於燥箱中160℃滅菌2小時
4． 一 般消毒: 無菌室內的凳、工作台、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進行滅菌，必須用其他方法進行消毒處理，採用2%石炭酸或來蘇兒水溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進行消毒
5． 空氣的消毒： 開啟紫外燈照射30—60分鍾 即可。
操作要領
准備工作
1． 先進行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30—60分鍾
2． 檢驗用的有關器材， 搬入無菌室前必須分別進會滅菌消毒
3． 操作人員必須將手清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進入無菌室
4． 進入無菌室後再一次消毒手部，然後才進行檢驗操作
操作過程注意事項
1． 動作要輕，不能太快，以免攪動空氣增加污染；玻璃器皿也應輕取輕放，以免破損污染環境
2． 操作應在近火焰區進行。
3． 接種環、接種針等金屬器材使用前後均需灼燒，灼燒時先通過內焰，使殘物烘乾後再灼燒滅菌
4． 使用吸管時，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必須用洗耳球操作。
5． 觀察平板時不好 開蓋，如欲沾取菌落檢查時，必需靠近火焰區操作，平皿蓋也不能 大開，而是上下蓋適當開縫。
6． 進行可疑致病菌塗片染色時，應使用夾子夾持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用過的玻片也應置於消毒液中浸泡消毒，然後再洗滌。
7． 工作結束，收拾好工作台上的樣品及器材，最後用消毒液擦拭工作台。

㈣ 微生物實驗室的安全操作規程

抄的哦

1 實驗室安全
1.1 微生物實驗室的生物安全性
1.2 科室安全文檔
（a）生物危害防護：實際操作規程見（《實驗室生物安全通用要求》，中華人民共和國國家標准GB19489-2004。2004-01-05發布，2004-10-01實施。）
（b）實驗室安全：原則和措施見（《微生物和生物醫學實驗室生物安全通用准則》，中華人民共和國衛生行業標准WS 233-2002。2002-12-03發布，2003-08-01實施。）
1.3 應用：

以上的操作規程應用於微生物科室的所有部門。工作人員或訪問人員必須遵守各項規定。
1.4 關於新規定或現行規定的修改案：

任何新規定或現行規定的修改案必須通知負責科室安全的人員及相關人員，他們將建議科室主任考慮實施。
1.5 生物性危害
1.5.1 與各種操作有關的生物危害水平取決於：
a.處理的傳染性物質的本身：

按照傳染性物質對個人和社區和潛在危險性以及經空氣傳播的可能性，其劃分成不同等級。所採用的等級劃分詳見」《實驗室生物安全通用要求》」；原則和措施（見《微生物和生物醫學實驗室生物安全通用准則》）。
b.使用的設備和設施：
處理不同等級的傳染性物質的要求在」實驗室安全」中已規定。這些符合要求的設備都要承擔重要臨床工作，科室負責人必須保證中應污染物水平。
c.培訓，特別是員工的安全性培訓和安全性經驗積累。所有員工應該接受一定訓練，能安全處理任何實驗室可能碰到的物質，避免將實驗不能處理或規定之外的傳染性物質暴露在實驗室，即使暴露事故在實驗室，即使暴露事故發生也要會正確處理。
1.5.2 傳染性物質的分類
1.5.2.1分類系統

生物危害防護：〔見1.2 (a)〕，根據生物因子對個體和群體的危害程度將其分為4級，危害等級Ⅳ最具危害性。
1.5.2.2危險群/生物安全水平：1－4
a.危險群/生物安全水平：1——對健康成人無致病性，對社區無危害性。通常一般微生物操作就足夠，不需特殊安全設備，工作的附近要有洗手設施。培養基上包含未鑒定物，因此，妥善處理對各級安全水平都至著重要。
b.危險群/生物安全水平：2——人類疾病相關物質，這種物質對實驗室工作人員有中度危險，並具有一定程度社區危險性。醫院微生物室所涉及的絕大多數物質屬此安全水平，生物危害警告應張貼，並且限制接近，應用醒目標語，若是能產生空氣傳播或飛濺的I，II類物質都就使用相就的操作台。實驗室就提供類似防護衣和手套，眼罩尤其是配戴隱形眼鏡者，也應提供類似安全水平的洗手設施，並且臨近工作區也應有高壓滅菌裝置。所有廢物和反復使用設備的去污染應有特定的程序。
c.危險群/生物安全水平：3——人類疾病相關物質，具有潛在空氣傳播性，能引起嚴重，致命疾病，對實驗室工作人員高度危險，並具有一定程度社區危險性。所有含有或懷疑含有生物案的標本必須標以」小心污染」標簽，並且同時標於盛放標本容器和申清單。然而作為預防保護還不足夠。應對所有血液，體液，分離的人體組織等有普通防護意識，它們都應視作傳染源。在此生物安全級，實驗室應控制對其接近。凡涉及該類物質都應使用I或II類工作台操作，也可以遵循II級操作注意事項，對所有廢物進行去污染處理，包括工作服和重復使用設備。
d.危險群/生物安全水平：4——對個人的危險如生物安全3級，但對社區有高度危險性。這些傳染性物質包括：

蜱源性腦炎病毒

支里半亞－剛果牛血熱病毒

Marburg
Virus

艾波拉病毒

Lagsa fever Virus

Junin HF Virus

Machupo HF Virus

Guanaruto HF Virus

Herpesvirus simiae (B Virus)
1.6 以下預防措施，所有實驗工作人員必須遵守：
1.6.1 工作服
a.所有實驗室成員在工作期間必須始終穿著所提供的工作服。離開實驗室時，工作服須掛在指定地方，不得在實驗室外冼工作服。
b.在處理含有或懷疑含有生物安全3級物質的標本時，必須在工作服外穿隔離衣。
c.在生物安全操作台內處理標本和培養基時，必須戴手套。
1.6.2 洗手池

洗手池須供應洗潔劑和紙巾。
1.6.3 洗手

所有工作人員在離開工作區必須洗手，並且要先脫去工作服和手套。
1.6.4 食物，飲水，吸煙，化妝品

食物和飲料不允許帶入任何處理標本的房間.不允許在處理標本的任何地方吸煙.不允許在處理標本的任何地方使用化妝品。
1.6.5 傷口和擦傷

手上的傷口和擦傷必須覆蓋保護物。
1.6.6 個人衣物

個人衣物不允許帶入實驗室，並且必須保存在帶鎖的櫃子里。
1.6.7 口吸移液管

這是禁用的。要求使用機械移液裝置。
1.7 常規預防措施應用於所有血液、體液、組織標本的操作中：
1> 無論何時都應盡可能避免使用注射器，針頭或其它銳器。
2> 使用過的針頭和一次性切割器必須丟入專門的帶有蓋子和桶內，以備安全處理、防止容器過滿盛裝。
3> 使用過的針頭不許重新使用或再用手操作。
4> 打爛的玻璃必須放入堅硬的容器（不要用手），然後再放入黑色垃圾袋，如果是污染的，使用黃色垃圾袋。
5> 在接觸具有潛在性傳染性標本培養基、組織，必戴保護性手套，防止皮膚直接接觸。如果手套有可見的污染，必須先除去污染，再更換。手上有皮炎或傷口的工作人員的需要間接接觸傳染性物質的人員應戴保護性手套。
6> 在處理完標本、結束工作，甚至在上述規定帶手套時，應常規洗手。
7> 當血液、血液製品或其它體液污染發生時，應停止工作洗手，戴一次性手套再清除污染區。建議用含有效氯1000ppm的次氯酸鈉溶液。如果污染區較大用浸有次氯酸鈉溶液的濕布覆蓋10min去污染，並標示相應的警告，丟棄廢物及手套到生物安全級物理容器。注意飛濺的水滴和流淌會將污染帶到主污染區以外。
8> 所有在實驗室使用的具有潛在污染性的物質都需去污染，最好先高壓，再做處理。
9> 任何可能產生飛濺或氣霧的操作都應在生物安全操作台里進行。這些操作包括離心，分離血清，混合，超聲，收集組織受精卵，以及處理含有濃集的感染物質標本。
1.8 實驗室物質處理
a> 黑色塑料袋用來收集未污染或經高壓過需處理的廢物。
b> 廢紙屢用來收未污染的廢紙，用過的紙巾等。
c> 所有可能傳染的物質必須高壓或焚化。
d> 所有丟棄的標本，培養基和實驗室廢物必須放在專門容器里
e> 用白色聚丙烯罐盛裝2%新鮮配置次氯酸液，以供工作中丟棄標本，污染吸頭，棉拭子臨時處理待一天工作結束之後，再經高壓處理。
f> 黃色塑料袋用來處理污染的實驗室廢物。它們應封口再由工人拿去焚燒。
g> 帶蓋，帶標簽硬質容器用來盛裝針頭的銳器。
1.9 實驗室傳染性物的消毒
高壓
a.所有培養基的傳染性物質都要高壓，除非准備焚燒的，高壓的最大好處是使傳染性物質離開實驗室可保證安全。
b.用作此目的的高壓設備應在醫學技師監督下由實驗室工人操作。
c.高壓設備應定期由醫院設備組測試，檢修。這些測試包括商業使有的芽胞試紙實驗。多個高壓設備應有使用記錄，並自使用之日起由醫學技師連續記錄。任何不符都要向安全人員報告。
1.10 去污染
去污染劑：
1> 次氯酸溶液：用白色聚丙烯罐裝新鮮配置的含有效氯1000ppm的2％次氯酸溶液，放在多個工作室。
2> 5%的Printol：其50％水溶液用來處理濺在地板和傢具上的污染。
3> 戊二醛：新鮮配製成一定濃度，主要用於不能使用次氯酸鈉的儀器去污染，如離心機等。
4> 75％乙醇：主要用於對清潔表面的快速去污染。
1.11 離心機
1.11.1 注意事項：
a> 使離心機用的試管應具是厚管或塑料的，離心前應仔細檢查是否缺損。
b> 離心機需放置在合適的位置，操作都應能看見離心缸，以便能正確地將離心架放在轉子上。
c> 離心桶和離心架配對使用，負載後需仔細平

㈤ 微生物實驗室管理規程

實驗室人員在工作的時候，要接觸各種微生物、試樣及檢驗過程中的物品0，這些物質中有些對人體有毒害作用，有些還具有易燃易爆性質；同時，各種儀器、電器、機械等設備，在使用中也可能存在危險性。因此，作為實驗室人員，必須遵守以下實驗室安全守則。
（1）實驗人員必須熟悉儀器、設備性能和使用方法，按規定要求進行操作；
（2）微生物室應保持室內通風良好，避免不必要的污染；
（3）凡接觸微生物的實驗，工作人員應小心使用，確保安全，使用後必須用酒精消毒手和檯面，有條件的必須在無菌室超凈工作台操作；。
（4）在無菌室操作時，必須穿工作服、戴工作帽及口罩，使用前必須經紫外線照射或其他方法消毒，才可使用，操作必須嚴格無菌操作，以免污染；
（5）不使用無標簽（或標志）容器盛放的試劑、試樣；
（6）實驗中產生的廢液、廢物應集中處理，不得任意排放；所用的培養物、被污染的玻璃器皿及陽性的檢驗標本，都必須用消毒水泡過夜或煮沸或高壓蒸汽滅菌等方法處理後再清洗；
（7）在實驗室中使用手提高壓滅菌鍋時，必須熟悉操作過程，操作時不得離開，時刻注意壓力表，不得超過額定范圍，以免發生危險；
（8）嚴格遵守安全用電規程。不使用絕緣損壞或接地不良的電器設備，不準擅自拆修電器。
（9）實驗完畢，實驗人員必須洗手及消毒後方可進食，並不準把食物、食具帶進實驗室。實驗室內禁止吸煙。
（10）實驗室應配備消防器材。實驗人員要熟悉其使用方法並掌握有關的滅火知識。
（11）實驗結束，人員離室前要檢查水、電、燃氣和門窗，確保安全。